一氧化氮(NO)測定試劑盒 (A012)

使用說明書

僅供體外研究使用,不用于臨床診斷!

第1版(2016年04月修訂)

[預期應用]

本試劑盒運用硝酸還原法定量測定血清、胃液、尿液、細胞培養上清或其它相關生物液體中一氧化氮(NO)含量。

[試劑盒內容]

試劑名稱數量(50/25T)試劑名稱數量(50/25T)

Reagent 1

2×6ml/1×6ml

Reagent 6

1/1

Reagent 2

2×6ml/1×6ml

Reagent 7

1×8mL//1×4ml

Reagent 3

1×12ml//1×6ml

Standard(10mmol/L

1×0.5ml/1×0.5ml

Reagent 4

1×6ml//1×3ml

Attachment

2×40ml/1×40ml

Reagent 5

1/1

Instruction manual

1/1

Note:Attachment 是雙蒸水.


[需自備的設備及試劑]

1、分光光度計(比色測定波長為550nm),0.5厘米光路玻璃試管              

2、恒溫水浴箱或恒溫箱(孵育溫度:37℃和90~100℃)              

3、臺式離心機              

4、微量移液器及吸頭            

5、漩渦混合儀   ,玻璃棒              

6、蒸餾水或去離子水


[試劑盒的儲存及有效期]

1、試劑1:-20℃或低于-20℃可保存3個月。使用前將試劑置于37℃或室溫下充分溶解。              

2、試劑2:-20℃或低于-20℃可保存3個月。使用前將試劑置于37℃或室溫下充分溶解。              

3、試劑3:室溫保存6個月。             

4、試劑4:室溫保存6個月。              

5、試劑5:避光保存。              

6、試劑6:避光冷藏保存。如果顏色變成深褐色,則不能使用。              

7、試劑7:室溫保存6個月。              

8、10mmol/L標準:-20℃或低于-20℃可保存6個月。 


[試劑準備]

1、混合試劑制備:混合試劑1和試劑2的比例為1:1,根據實驗需求量配置。完全混合后,需在24小時內使用。

2、試劑5:粉末×1瓶,使用時,加入20ml(50T)或10ml×(25T)90OC~100℃熱蒸餾水完全溶解后,避光儲存。試劑5為過飽和溶液,最好加入23ml(50T)/11.5ml(25T)熱蒸餾水(考慮熱膨脹),同時水浴加熱,并用玻璃棒攪拌,使其完全溶解。配好的試劑5存放時可能會出現晶體,使用前請加熱并攪拌,使其完全溶解。

3、試劑6:粉末×1瓶,使用時加入8ml(50T)或4ml(25T)雙蒸餾水溶解。避光冷藏。如果顏色變成深褐色,請不要使用。

4。顯色劑:根據實驗需求量配置(配置好的顯色劑,可在1個月內使用)。試劑5、試劑6和試劑7的混合比例為2.5:1:1。可存放在40ml干凈的方形瓶中,避光。低溫存放可能會出現晶體。再次使用時,100℃水浴加熱,反復搖動使其完全溶解。

5。100μmol/L標準工作液配制:取0.1ml標準品,加入雙蒸餾水,直至體積達到10ml(100倍稀釋),充分混合,濃度為100μmol/L標準工作液。準備后需立即使用。


[標本處理]

1、液體樣品(如血清、胃液、尿液、細胞培養上清和其他生物液體等)NO測定:

預處理:根據實驗方法。

2、組織樣品NO測定

預處理:根據實驗方法。


[操作步驟]

1、液體樣品NO測定

操作表:


空白

標準品

樣本

雙蒸水 (ml

0.1

100μmol/L 標準品工作液 (ml)


0.1

液體樣本 (ml)



0.1

混合試劑 (ml)

0.40.40.4
充分攪拌,在37℃水浴中孵育60分鐘。

試劑 3 (ml)

0.20.20.2

試劑 4 (ml)

0.10.10.1
用漩渦混合儀充分攪拌30秒鐘,放置40分鐘,3500~4000轉離心10分鐘,取上清液進行顯色反應。

上清 (ml)

0.50.50.5
?

顯色液(ml

0.60.60.6
充分攪拌,放置10分鐘,吸取反應液于比色皿(0.5cm)中,在550nm下測量OD值(用蒸餾水調零)。

說明:

a、如果在冬天完成試驗,請在37℃預熱所有試劑5分鐘。

b、如果上清液不足,請延長離心時間或減少上清取樣量(例如0.4ml或0.45ml),確保所有試管上樣體積一致,試管中不要有沉淀物。


2、組織樣品NO測定

操作表:


空白

標準品

樣本

雙蒸水 (ml

0.50.4

100μmol/L 標準品工作液 (ml)


0.1


勻漿  (ml)



0.5

混合試劑 (ml)

0.40.40.4
充分攪拌,在37℃水浴中孵育60分鐘。

試劑 3 (ml)

0.20.20.2

試劑 4 (ml)

0.10.10.1
用漩渦混合儀充分攪拌30秒鐘,放置40分鐘,3500~4000轉離心10分鐘,取上清液進行顯色反應。

上清 (ml)

0.80.80.8
?

顯色液(ml

0.60.60.6
充分攪拌,放置10分鐘,吸取反應液于比色皿(0.5cm)中,在550nm下測量OD值(用蒸餾水調零)。

說明:

a、如果在冬天完成試驗,請在37℃預熱所有試劑5分鐘。

b、如果上清液不足,請延長離心時間或減少上清取樣量(例如0.4ml或0.45ml),確保所有試管上樣體積一致,試管中不要有沉淀物。


[實驗原理]

NO化學性質非常活潑,易轉化為硝酸鹽(NO3-)和亞硝酸鹽(NO2-),NO2-也可轉化為NO3-。本試劑盒采用硝酸還原酶特異地將NO3-還原成NO2-,通過測定OD值計算NO含量。

[樣本值]

1、推薦采樣量:

牛血清:300μL

綿羊血清:300μL

大鼠和小鼠血清:100μL

兔血清:100μL

10%組織勻漿:500μl

細胞裂解液:500μL

細胞培養上清液:100μL


2、正常NO含量:

樣本

樣本量(僅供參考)

NO含量(僅供參考)

大鼠血清

100μl

38.0±23.4μmol/L

小鼠血清

100μl

49.96±23.76μmol/L

兔血清

100μl

99.16±39.5μmol/

狗血清

100μl

89.51±32.13μmol/L

[說明]

1、試劑1、試劑2和標準需避免反復凍融。如果要分次實驗(>3次),那么請將試劑1、試劑2和標準分裝儲存,根據每次實驗的使用量分裝及配置試劑。制備好的顯色劑需避光。

2、樣本不立即用于實驗(如血清、血漿、組織等),可置于-70℃或低于-70℃保存。凍存樣品可在半年內使用。

3、所有試劑配制和空白管需使用不含NO2-的雙蒸水或三蒸水(試劑盒有雙蒸餾水)。

4、完成反應和離心后,取上清時避免吸入沉積物,否則OD值會大幅度增高,嚴重干擾結果的有效性。

5、試管選擇:

a、建議使用一次性塑料試管。

b、若要使用玻璃試管,請將其浸泡在洗滌劑溶液中超過半小時,煮沸0.5~1小時,小心刷洗,用自來水沖洗15~20次,棄水,用蒸餾水沖洗1~2次,烘干后使用。


[下載]

MSDS


  • Nitric Oxide (NO)Assay Kit (A012)
圖片展示
  • Certificate
通過ISO 9001、ISO 13485質量體系認證
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